Question

【題目】人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫用價值，只能從血漿中制備。下圖是以基因工程技術獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑。

（1）獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取__合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用 __技術擴增HSA基因。下圖中箭頭表示一條引物結合模板的位置及擴增方向，請用箭頭在方框內標出標出另一條引物的位置及擴增方向。

_______________

（2）啟動子通常具有物種及組織特異性，構建在水稻胚乳細胞內特異表達rHSA的載體，需要選擇的啟動子是__（填寫字母，單選）。

A．人血細胞啟動子 B．水稻胚乳細胞啟動子 C．大腸桿菌啟動子 D．農桿菌啟動子

（3）利用農桿菌轉化水稻受體細胞的過程中，需添加酚類物質，其目的是__。

（4）人體合成的初始HSA多肽，需要經過膜系統加工形成正確的空間結構才能有活性。與途徑II相比，選擇途徑I獲取rHSA的優勢是__。

（5）為證明rHSA具有醫用價值，須確認rHSA與__的生物學功能一致。

Answer 1

【答案】總RNA（或mRNA） PCR B 吸引農桿菌移向水稻受體細胞，有利于目的基因成功轉化 水稻是真核生物，具有膜系統，能對初始rHSA多肽進行高效加工 HSA

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

3、將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）為獲取HSA基因，可通過反轉錄法，首先需采集人的血液，提取合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用PCR技術擴增HSA基因．由于DNA兩條鏈是反向平行的，復制時也是方向相反，如圖2中箭頭箭頭表示一條引物結合模板的位置及擴增方向，則另一條引物位于另一條鏈的相反一端．如圖所示：。

（2）啟動子通常具有物種及組織特異性，故若構建在水稻胚乳細胞內特異表達rHSA的載體，需要選擇的啟動子是水稻胚乳細胞啟動子。

（3）利用農桿菌轉化水稻受體細胞的過程中，需添加酚類物質，其目的是吸引農桿菌移向水稻受體細胞，有利于目的基因成功轉化。

（4）由于大腸桿菌為原核生物，無生物膜系統，而水稻為真核生物，具有生物膜系統，故在人體合成的初始HSA多肽，與途徑Ⅱ相比，選擇途徑I獲取rHSA的優勢是 水稻是真核生物，具有膜系統，能對初始rHSA多肽進行高效加工。

（5）為證明rHSA具有醫用價值，需對基因工程的產物進行鑒定，即確認rHSA與HSA的生物學功能一致。