Question

【題目】Rag2 基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞�？蒲腥藛T利用胚胎干細胞（ES 細胞）對 Rag2 基因缺失小鼠進行基因治療。其技術流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應去除卵母細胞的_____。小鼠體細胞體外培養時， 所需氣體主要是 O2 和 CO2，其中 CO2 的作用是維持培養液（基）的_____。

（2）步驟②中，重組胚胎培養到_________期時，可從其內細胞團分離出 ES 細胞。體外培養條件下，ES 細胞在_____細胞上，能夠維持只增殖不分化的狀態。

（3）步驟③中，需要構建含有 Rag2 基因的表達載體�？梢愿鶕� Rag2 基因的__________設計引物，利用 PCR 技術擴增 Rag2 基因片段。PCR 過程需要經過多次循環，每一個循環包括：加熱變性→冷卻復性→_____，其中冷卻復性的目的_________。用 HindⅢ和 PstⅠ限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得 Rag2 基因片段。為將該片段 直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有_____酶的酶切位點。

（4）為檢測 Rag2 基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的_____，用_______________的抗體進行雜交實驗。

Answer 1

【答案】細胞核 pH值（或酸堿度） 囊胚 飼養層 核苷酸序列 加熱延伸 使引物與互補鏈結合 HindⅢ和PstⅠ 蛋白質； 抗Rag2蛋白

【解析】

分析題圖：圖示是利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療的過程圖解，其中①表示核移植過程，②表示早期胚胎培養過程，③表示采用基因工程技術將目的基因導入受體細胞。

（1）步驟①中，在核移植前應去除卵母細胞的細胞核。小鼠體細胞體外培養時，所需氣體主要是O2和CO2，其中CO2的作用是維持培養液（基）的pH值（或酸堿度）。
（2）囊胚期才出現內細胞團，內細胞團細胞具有發育的全能性，屬于胚胎干細胞；體外培養條件下，ES細胞在飼養層細胞上或在添加抑制因子的培養液中，能夠維持只增殖不分化的狀態。
（3）步驟③中，需要構建含有Rag2基因的表達載體�？梢愿鶕�Rag2基因的核苷酸序列設計引物，利用PCR技術擴增Rag2基因片段。PCR過程需要經過多次循環，每一個循環包括：加熱變性→冷卻復性→加熱延伸，其中冷卻復性的目的使引物與互補鏈結合。構建基因表達載體時，應該用同種限制酶切割外源DNA和運載體，因此用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點。
（4）為檢測Rag2基因的表達情況，可采用抗原﹣抗體雜交法，即提取治療后小鼠骨髓細胞的蛋白質（抗原），用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交實驗。