Question

【題目】玉米自交系（遺傳穩定的育種材料）B具有高產、抗病等優良性狀，但難以直接培育成轉基因植株，為使其獲得抗除草劑性狀，需依次進行下列步驟試驗：獲得抗除草劑轉基因玉米自交系A，技術路線如下圖。

（1）為防止酶切產物自身環化，構建表達載體需用兩種限制酶，選擇的原則是________

①Ti質粒內，每種限制酶只有一個切割位點

②G基因編碼蛋白質的序列中，每種限制酶只有一個切割位點

③酶切后，G基因形成的兩個黏性末端序列不相同

④酶切后，Ti質粒形成的兩個黏性末端序列相同

A．①③ B．①④ C．②③ D．②④

（2）如表所示是四種玉米自交系幼胚組織培養不同階段的結果。據表可知，細胞脫分化時使用的激素是________，自交系________的幼胚最適合培養成愈傷組織作為轉化受體。

激素 結果 自交系	2，4-D （2．0mg/L）	6-BA （0．5mg/L）	IBA （2．0mg/L）
	愈傷組織形成率（%）	芽的分化率（%）	根的誘導率（%）
甲	99	13	90
乙	85	80	87
丙	88	83	12
丁	16	85	83

（3）農桿菌轉化愈傷組織時，T-DNA攜帶插入其內的片段轉移到受體細胞。篩選轉化的愈傷組織，需使用含________的選擇培養基。

（4）轉化過程中，愈傷組織表面常殘留農桿菌，導致未轉化愈傷組織也可能在選擇培養基上生長。含有內含子的報告基因只能在真核生物中正確表達，其產物能催化無色物質K呈現藍色。用K分別處理以下愈傷組織，出現藍色的是________。

A．無農桿菌附著的未轉化愈傷組織

B．無農桿菌附著的轉化愈傷組織

C．農桿菌附著的未轉化愈傷組織

D．農桿菌附著的轉化愈傷組織

（5）組織培養獲得的轉基因植株（核DNA中僅插入一個G基因）進行自交，在子代含G基因的植株中，純合子占________。繼續篩選，最終選育出抗除草劑純合自交系A。

Answer 1

【答案】A 2，4-D 乙 除草劑 BD 1/3

【解析】

1、構建基因表達載體時需要同一種限制酶切割目的基因和運載體，用DNA連接酶鏈接，為防止酶切產物自身環化，切割目的基因兩端常用兩種酶分別切割。

2、據表中信息可知：細胞脫分化時使用的激素是2，4-D，比較甲乙丙丁4種自交體系，發現自交系乙芽的分化率、根的誘導率都較高，因此自交系乙的幼胚最適合培養成愈傷組織作為轉化受體。

3、轉化愈傷組織中含有內含子的目的基因，可產生該基因表達產物，能催化無色物質K呈現藍色，即K處理該愈傷組織能呈現藍色。

（1）G基因或Ti質粒被限制酶切割后自身環化的主要原因是G基因或Ti質粒被切割后形成了相同的黏性末端，所以為了防止酶切產物自身環化，應確保切割G基因或Ti質粒后形成的兩個黏性末端不同；為防止Ti質粒被切成多個片段，失去其應有的功能，因此Ti質粒內的每種限制酶只有一個切割位點。

故選A。

（2）脫分化的結果是形成愈傷組織，從表格中可以看出，愈傷組織的形成率主要與2，4-D有關。從表格中可以看出，自交系乙的愈傷組織形成率、芽的分化率及根的誘導率都較高，所以該自交系的幼胚最適合作為培養成愈傷組織的轉化受體。

（3）由于G基因是抗除草劑基因，所以檢測目的基因是否進入受體細胞的方法是用含除草劑的培養基進行培養，如果愈傷組織能正常生存則說明轉化成功。

（4）根據題意可知，轉化愈傷組織能使報告基因正確表達得到能催化物質K呈現藍色的產物，無論這種愈傷組織是否附著有農桿菌。

故選BD。

（5）由于核DNA中只插入了一個G基因，所以該轉基因植株屬于雜合子，相當于Gg（g表示未插入G基因），故其自交后含G基因的植株中純合子占1/3。