Question

多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果膠使細胞壁破損。成熟的番茄果實中，PG合成顯著增加，能使果實變紅變軟，但不利于保鮮。利用基因工程減少PG基因的表達，可延長果實保質期�？茖W家將PG基因反向接到Ti質粒上，導入番茄細胞中，得到轉基因番茄，具體操作流程如下圖。據圖回答下列問題：

(1)若已獲取PG的mRNA，可通過________獲取PG基因。重組質粒轉移到大腸桿菌中的目的是____________。

(2)用含目的基因的農桿菌感染番茄原生質體后，可用含有________的培養基進行篩選，理由是______________。之后，還需將其置于質量分數為25%的蔗糖溶液中，觀察細胞________現象來鑒別細胞壁是否再生。

(3)由于導入的目的基因能轉錄出反義RNA，且能與________互補結合，因此可抑制PG基因的正常表達。若________，則可確定轉基因番茄培育成功。

(4)將轉入反向鏈接PG基因的番茄細胞培育成完整的植株，需要用________技術；其中，愈傷組織經________形成完整植株，此過程除營養物質外還必須向培養基中添加____________________。

Answer 1

(1)PG的mRNA在逆轉錄酶的作用下，逆轉錄為PG基因。重組質粒轉移到大腸桿菌中，目的是大量復制目的基因。(2)根據圖示，PG基因插在四環素抗性基因中間，在BamHⅠ酶作用下，四環素抗性基因被破壞了，即重組質粒中含卡那霉素抗性基因，但不含四環素抗性基因，故含有PG基因的農桿菌感染番茄原生質體后，可用含有卡那霉素的培養基進行篩選。若將其置于質量分數為25%的蔗糖溶液中，可通過觀察細胞是否發生質壁分離現象來鑒別細胞壁是否再生。(3)根據圖示，導入的目的基因能轉錄出PG反義RNA，天然PG基因轉錄產生正常的RNA，這兩種RNA能互補結合，從而抑制了PG基因的正常表達。若番茄果實的保質期延長，則確定轉基因番茄培育成功。(3)利用植物組織培養技術，將該轉基因番茄培育成植株。其中，愈傷組織經再分化形成完整植株。此過程除營養物質外，還必須向培養基中添加植物激素。

答案：(1)逆轉錄法　大量復制目的基因(或克隆目的基因)

(2)卡那霉素　重組質粒中含卡那霉素抗性基因而四環素抗性基因被破壞　是否發生質壁分離

(3)天然的PG基因轉錄的mRNA　番茄果實的保質期延長

(4)植物組織培養　再分化(或細胞增殖和分化)　植物激素(生長調節劑、生長素和細胞分裂素)