Question

【題目】橙子味酸甜，營養豐富。橙汁易貯運，是世界上最多人飲用的果汁之一。

回答下列問題：

（1）制作橙汁時常加入果膠酶，果膠酶能分解果膠來提高橙汁的___________（答出兩點）。為回收溶液中的果膠酶一般采用___________法將酶固定（答出兩種方法）。

（2）果園土壤中的脂環酸芽孢桿菌，需氧，耐熱，生長溫度35-80℃。橙汁生產過程中若感染此菌，會影響橙汁品質。為優化橙汁生產工藝，進行了下述研究。

[實驗一：脂環酸芽孢桿菌的篩選和鑒定]

實驗步驟：

a配制K氏培養基：

b取果園土壤，制備土壤稀釋液：

c將土壤稀釋液接種在K氏培養基平板上，培養后獲得單菌落。

d對獲得的目的菌落進行篩選和鑒定。

①K氏培養基的主要成分有酵母膏、蛋白胨和葡萄糖等，其中能提供生長因子的是___________。

②將上述步驟c初步分離得到的目的菌株制成菌懸液，于80℃水浴中熱處理10min后，取0．1mL涂布接種到K氏培養基平板上，45℃培養48h。此操作的目的是___________。

A．用80℃水浴殺死雜菌和芽孢

B．用80℃水浴進一步篩選出耐熱目的菌株

C．分離純化目的菌株

D．給細菌補充新的營養物質

③用接種環將篩得的目的菌株插入到半固體K氏培養基中，如下左圖。接種時為什么要靠近酒精燈火焰：___________。45℃培養4-5天后進行觀察，能夠判斷是脂環酸芽孢桿菌生長的試管是___________。

[實驗二：脂環酸芽孢桿菌控制方法的研究]

實驗步驟：

a稱取一定量的抑菌劑，配制成不同濃度的抑菌液。

b將實驗一得到的菌株原液適當稀釋得到菌株稀釋液。

c分別取不同濃度的抑菌液加入到K氏培養液中，再分別加入菌株稀釋液形成菌懸液

（各試管中加入的同一種液體均為等量）。培養一段時間后，將上述菌懸液分別接種到K氏平板培養基上。

①實驗二中，對照組的設置應該是：_____________________________。

②為便于檢測抑菌劑的抑菌效果，宜采用哪種接種方法?_ ___________，為什么? ______________。

Answer 1

【答案】出汁率和澄清度 化學結合法、物理吸附法 酵母膏、蛋白胨 B、C 酒精燈火焰的外焰上方區域是高溫無菌區，接種時在酒精燈火焰附近進行，可以防止雜菌污染 D 等量的無菌水加入到K氏培養液中，再加入等量的菌株稀釋液，培養相同時間后，將菌懸液接種到K氏平板培養基上 涂布法 因為通過計算涂布法培養得到的菌落，可以反映抑菌劑的抑菌效果

【解析】

分離純化微生物常常采用的接種方法有兩種：平板劃線法和稀釋涂布平板法，但前者只能分離純化得到單菌落，后者不僅可以得到單菌落，還能用于活菌計數。根據題意分析，便于檢測抑菌劑的抑菌效果，采用稀釋涂布平板法的，可以反映抑菌劑的抑菌效果。

（1）制作橙汁時可以加入果膠酶以分解果膠，從而提高橙汁的出汁率和澄清度。由于果膠酶溶于水，不利于重復利用，適合采用化學結合法或物理吸附法將果膠酶固定在某種介質上，使之成為不溶于水而又有酶活性的制劑。

（2）實驗一：

①培養基一般添加的有水、無機鹽、碳源、氮源及生長因子，結合題意葡萄糖主要提供碳源，而酵母膏和蛋白胨還能提供生長因子。

②將分離得到的目的菌株制成菌懸液，于80℃水浴中熱處理10min，再取0.1mL熱處理后的菌液涂布接種到K氏培養基平板上，45℃培養48h，其中80℃水浴中熱處理10min，能殺死部分微生物，但不能殺死芽孢和孢子，同時土壤中的脂環酸芽孢桿菌需氧，耐熱，也能起到篩選目的菌的作用。故選BC。

③酒精燈火焰的外焰上方區域是高溫無菌區，接種時在酒精燈火焰附近進行，可以防止雜菌污染。脂環酸芽孢桿菌需氧型微生物，故為了獲得更多的氧氣，其應生長在培養基的上層。即D正確，ABC錯誤。

實驗二：

①為了對照抑菌劑的抑菌效果，應控制好無關變量，用等量的無菌水代替抑菌液，其余的試劑和實驗條件都保持相同且適宜。
②為便于檢測抑菌劑的抑菌效果，最好在培養基表面能直接反映出菌落數目的差異，故采用涂布法進行接種，因為通過計算涂布法培養得到的菌落，可以反映抑菌劑的抑菌效果。