Question

【題目】下圖是轉基因獼猴培養過程示意圖，請據圖回答：

（1）獲取綠色熒光蛋白基因的方法包括____________、利用 PCR 技術擴增和用化學方法 直接人工合成等�；�因工程的核心步驟是________________________用圖中數字表示），②過程常用的方法是________________________________________________。

（2）從分子水平檢測目的基因是否成功導入受體細胞的方法是__________________ 技術。

（3）利用 PCR 技術擴增目的基因的前提是要有一段已知的目的基因核苷酸序列，根據這 一序列設計并合成________________________________________________。

（4）從雌性獼猴體內采集的卵母細胞，一般要培養到____________ 階段才能進行體外受 精。判斷卵子受精的重要標志是____________________________________。

（5）圖中過程⑦稱為____________ ，所用的早期胚胎通常是發育至____________ 期的胚 胎，受體雌猴對移入子宮的外來胚胎不會發生 ____________反應，這為胚胎在受體雌猴體 內的存活提供了可能。

Answer 1

【答案】從基因文庫中獲取 ① 顯微注射法 DNA分子雜交 （成對的）引物 減數第二次分裂中期（MⅡ中期） 在卵細胞膜和透明帶的間隙可以觀察到兩個極體 胚胎移植　 囊胚（或桑椹胚） 免疫排斥

【解析】

圖示為轉基因獼猴的培育過程示意圖。標記基因的作用：是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。

基因工程技術的基本步驟：目的基因的獲取→基因表達載體的構建→將目的基因導入受體細胞→目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因用DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA用分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質用抗原—抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

PCR是聚合酶鏈式反應的縮寫，其擴增目的基因的原理是： DNA半保留復制的原理。擴增目的基因的前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據這一序列合成（成對的）引物。反應需要：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶（Taq酶）。

胚胎移植，又稱受精卵移植，是指將雌性動物的早期胚胎，或者通過體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態相同的雌性動物體內，使之繼續發育為新個體的技術。相關技術包括：同期發情、超數排卵、胚胎的收集和移植（卵母細胞的體外成熟、精子的體外獲能、體外受精、受精卵的體外培養和移植等一系列步驟）。

（1）綠色熒光蛋白基因為目的基因，獲取目的基因的方法包括：從基因文庫中獲取目的基因、利用PCR技術擴增目的基因和用化學方法直接人工合成等；基因工程的核心步驟是基因表達載體的構建，即圖示中的①過程。②過程是將目的基因導入受精卵這一受體細胞，常用的方法是顯微注射法；

（2）目的基因的檢測與鑒定分為分子水平上的檢測和個體水平上的鑒定。分子水平檢測目的基因是否成功導入受體細胞的方法是DNA分子雜交技術；

（3）PCR擴增目的基因的前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據這一序列合成（成對的）引物。

（4）受體細胞常選處在MⅡ中（減數第二次分裂中）期的去核卵母細胞，通過電脈沖（或電刺激）進行激活，使其完成減數分裂和發育進程；受精過程包括5個階段：1、精子穿過放射冠 2、精子穿過透明帶 3、精子進入卵黃 4、原核形成 5、配子融合。是否完成受精的標志是：在卵黃膜和透明帶的間隙可以觀察到二個極體；

（5）圖中過程⑦為胚胎移植，所用的早期胚胎通常是發育至桑椹胚或囊胚期的胚胎，由于胎盤屏障等原因，受體雌猴對移入子宮的外來胚胎不會發生免疫排斥反應，這為胚胎在受體雌猴內的存活提供了可能。