Question

【題目】一般情況下，一定濃度的抗生素會殺死細菌，但變異的細菌可能產生耐藥性。在實驗室連續培養細菌時，如果向培養基中添加抗生素，耐藥菌有可能存活下來。某研究小組欲通過觀察細菌在含有抗生素的培養基上的生長狀況，探究卡那霉素對大腸桿菌的選擇作用，實驗步驟如下：

①制作經______法滅菌的牛肉膏蛋白胨液體培養基及固體培養基平板；

②用記號筆在平板的______（填“皿蓋”或“皿底”）畫兩條相互垂直的直線，將平板分為4個區域，分別標號為a、b、c、d；

③取少量的大腸桿菌的培養液，用無菌的______將其均勻地涂抹在培養基平板上；

④設置a號區域為對照組，其余區域為實驗組，進行相關操作；

⑤將平板______（填“正放”或“倒置”）于37℃的恒溫箱中培養12～16小時；

⑥觀察培養基上大腸桿菌的生長狀況，看濾紙片附近是否出現了抑菌圈。如果有（如圖示），從抑菌圈邊緣的菌落上挑取細菌，接種到已滅菌的液體培養基中培養，然后重復步驟③～⑤。如此重復幾代，記錄每一代培養物中實驗組抑菌圈直徑的平均值。

問答下列問題。

（1）將以上實驗步驟補充完整：①________②________③________⑤________。

（2）步騾④中，實驗組的操作是________。

（3）在連續培養幾代后，抑菌圈的平均直徑________（填“不變”、“變小”或“變大”），原因是________。

Answer 1

【答案】高壓蒸汽滅菌 皿底 涂布器 倒置 用無菌的鑷子分別夾取1張含卡那霉素的濾紙片放在b、c、d區域的中央，蓋上皿蓋 變小 卡那霉素對大腸桿菌起選擇作用，隨著培養次數增多，耐藥菌的比例增大

【解析】

選擇培養基：根據某種微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養基使混合菌樣中的劣勢菌變成優勢菌，從而提高該菌的篩選率。

稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。

（1）①培養基需要經過高壓蒸汽滅菌法滅菌；

②由于平板需要倒置，所以在皿底劃線作為標記；

③將菌液均勻的涂布需要經過滅菌的涂布器進行涂布；

⑤平板需要倒置培養。

（2）本實驗的目的是探究卡那霉素對大腸桿菌的選擇作用，所以實驗組需要用無菌的鑷子分別夾取1張含卡那霉素的濾紙片放在b、c、d區域的中央，蓋上皿蓋。

（3）由于卡那霉素對大腸桿菌起選擇作用，隨著培養次數增多，耐藥菌的比例增大，所以抑菌圈直徑變小。