Question

【題目】如圖為某質粒表達載體簡圖，小箭頭所指分別為限制酶39．如圖為某質粒表達載體簡圖，小箭頭所指分別為限制酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點，ampR為青霉素抗性基因，tctR為四環素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復制原點。又知植物甲具有極強的耐旱性，其耐旱性與某個基因有關。若從該植物中獲得該耐旱基因，并將其轉移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。已知耐旱基因兩端分別有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在內的多種酶的酶切位點。據圖回答：

（1）獲得耐旱基因常用基因文庫法。理論上， 文庫中含有該生物的全部基因；而 文庫中含有生物的部分基因。

（2）實驗中，為了防止目的基因和質粒表達載體在酶切后產生的末端發生任意連接，酶切時應選用的酶是 。酶切產物用DNA連接酶處理后，兩兩連接的產物有 種。

（3）將上述連接產物導入無任何抗藥性的宿主細胞后，將這些宿主細胞接種到含四環素的培養基中，能正常生長的宿主細胞所含有的連接產物是 。

（4）目的基因表達時，RNA聚合酶識別和結合的位點是 ，其合成的產物是 。

（5）假如用得到的二倍體轉基因耐旱植株自交，子代中耐旱植株與不耐旱植株的數量比為3：1時，則可推測該耐旱基因整合到了 （填“同染色體的一條上”或“同染色體的兩條上”）。

Answer 1

【答案】（1）基因組文庫 cDNA文庫

（2）EcoRⅠ和BamHⅠ 3

（3）載體-載體連接物（或質粒-質粒連接物）

（4）啟動子 mRNA

（5）同染色體的一條上

【解析】（1）基因文庫包括兩種，其中基因組文庫含有該生物的全部基因；而cDNA文庫文庫中含有生物的部分基因。

（2）為了防止目的基因和質粒表達載體在酶切后產生的末端發生任意連接，應該選擇EcoRⅠ和BamHⅠ進行切割。酶切產物用DNA連接酶處理后，兩兩連接的產物有質粒與質粒、質粒與目的基因、目的基因與目的基因3種。

（3）由于目的基因上沒有抗四環素的基因，所以將上述連接產物導入無任何抗藥性的宿主細胞后，將這些宿主細胞接種到含四環素的培養基中，能正常生長的宿主細胞所含有的連接產物是載體-載體連接物（或質粒-質粒連接物）。

（4）基因表達載體中，啟動子被RNA聚合酶識別后開始轉錄，形成mRNA。

（5）假如用得到的二倍體轉基因耐旱植株自交，子代中耐旱與不耐旱植株的數量比為3：1時，該比例符合雜合子（Aa）自交后代的結果，則可推測該耐旱基因（A）整合到了同源染色體的一條上。