Question

【題目】請分析回答與微生物有關的問題：

（1）微生物接種方法很多，最常用的是平板劃線法和_________。平板劃線時，接種環通過________滅菌，在第二次及以后的操作時，總是從上一次的末端開始，這一樣做的目的是_________________。

（2）要從土壤中分離純化產脂肪酶細菌時，常常需要進行選擇培養，目的是__________，然后再接種并培養，接種時挑取了菌液在3塊相同平板上劃線，結果其中1塊平板的各劃線區均未見菌落生長，最可能的原因是_________________。

（3）為了統計樣品中活菌的數目，在細菌培養基平板上，均接種稀釋倍數為105的土壤樣品液0.1 ml，培養一段時間后，平板上長出的細菌菌落數分別為13、156、462、178和191，則每克士壤樣品中的細菌數量___________個。對菌落數目進行統計時，應選取菌落數日穩定時的記錄作為結果，這樣做的原因是_______________________________。

（4）為長期保存純化的優質菌種，可以采用__________________的方法。

Answer 1

【答案】稀釋涂布平板法 灼燒 將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落 增大產脂肪酶細菌的濃度 接種環溫度過高，產脂肪酶細菌被殺死 1.75×108 防止因培養時間不足而導致遺漏菌落數目 甘油管藏

【解析】

單菌落分離法包含劃線分離法和稀釋涂布平板法，常用于分離獲得單菌落。劃線分離法是用接種環以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，并逐步分散開來。稀釋平板計數是根據微生物在固體培養基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養特征設計的計數方法，即一個菌落代表一個單細胞。計數時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養基內。經培養后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統計菌落數目，即可計算出樣品中的含菌數。此法所計算的菌數是培養基上長出來的菌落數，故又稱活菌計數。

（1）平板劃線法和稀釋涂布平板法是兩種微生物接種最常用的方法。平板劃線時，將接種環在酒精燈火焰上灼燒，進行灼燒滅菌。在第二次及以后的操作時，總是從上一次的末端開始，菌體密度越來越小，這樣可以將聚集的菌體逐步稀釋，可以獲得單菌落。

（2）要從土壤中分離純化產脂肪酶細菌時，常常需要進行選擇培養，把其它雜菌淘汰掉，增大脂肪酶細菌的濃度。3塊相同平板上劃線，只有1塊平板的各劃線區均未見菌落生長，說明原菌種及培養基都沒問題，最可能的原因是接種環溫度過高，產脂肪酶細菌被殺死。

（3）平板上長出的細菌菌落數只有三個（156、178、191）是符合要求的，則每克士壤樣品中的細菌數量為（156+178+191）÷3÷0.1×105=1.75×108個。菌落形成需要時間，因此對菌落數目進行統計時，應選取菌落數日穩定時的記錄作為結果，這樣做可防止因培養時間不足而導致遺漏菌落數目。

（4）甘油管冷凍保藏法是利用微生物在甘油中生長和代謝受到抑制的原理達到保藏目的。長期保存純化的優質菌種，可以采用甘油管藏的方法。