Question

【題目】環境污染物多聚聯苯難以降解，受其污染的土壤中常同時存在重金屬污染。研究發現聯苯降解菌內的聯苯水解酶是催化多聚聯苯降解的關鍵酶。回答下列問題：

（1）為了從富含多聚聯苯的環境中分離聯苯降解菌，培養基中加入多聚聯苯作為____________，該培養基屬于____________（填“選擇”或“鑒定”）培養基。用平板劃線法純化該細菌時，第1次劃線及其以后劃線總是從上次劃線的末端開始是為了____________。

（2）為了能夠反復利用聯苯水解酶，可以采用____________技術，該技術的另一個優點是___________。

（3）若從聯苯降解菌中分離并得到純度較高的聯苯水解酶，純化該酶常用的方法是____________，采用該方法先分離出分子質量____________的蛋白質。

（4）下圖中實線表示聯苯水解酶催化的反應速度與酶濃度的關系，虛線表示在其他條件不變的情況下，底物濃度增加一倍，反應速度與酶濃度的關系，能正確表示兩者關系的是____________。

Answer 1

【答案】（唯一）碳源 選擇 將聚集的菌體逐漸稀釋以便獲得單個菌落 固定化酶 提高產物的純度 凝膠色譜法 較大 B

【解析】

微生物的培養基按功能分為選擇培養基和鑒別培養基；固定化酶是指用物理學或化學的方法將酶與固相載體結合在一起形成的仍具有酶活性的酶復合物，在催化反應中，它以固相狀態作用于底物，反應完成后，容易與水溶性反應物和產物分離，可被反復使用；凝膠色譜法的原理：凝膠色譜法是根據相對分子質量的大小來分離蛋白質的有效方法，相對分子質量小的蛋白質容易進入凝膠內部的通道，路程長，移動的速度慢，相對分子質量大的蛋白質不容易進入凝膠內部的通道，路程短，移動的速度快，因此相對分子質量不同的蛋白質得以分離。

（1）為了從富含多聚聯苯的環境中分離聯苯降解菌，應該用以多聚聯苯作為唯一碳源的選擇培養基；用平板劃線法純化該細菌時，在進行第二次以及其后的劃線操作時要從上一次劃線的末端開始劃線，因為每次劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。

（2）為了能夠反復利用聯苯水解酶，可以采用固定化酶技術，該技術可使酶與產物分開，因此提高了產物的純度。

（3）純化該酶常用的方法是凝膠色譜法，該方法是根據相對分子質量的大小來分離蛋白質的有效方法，相對分子質量小的蛋白質容易進入凝膠內部的通道，路程長，移動的速度慢，相對分子質量大的蛋白質不容易進入凝膠內部的通道，路程短，移動的速度快，因此采用該方法先分離出分子質量較大的蛋白質。

（4）根據題意分析，開始時酶不夠，底物加不加倍都不能增加反應的速率；隨著酶濃度增大，反應速率才有區分，故選B。