Question

【題目】下圖表示某質粒載體，圖2表示植物甲的抗旱基因，該基因兩端分別包括EcoRⅠ、BamHⅠ在內的多種限制酶的酶切位點。據圖回答下列問題：

（1）目前獲取目的基因的常用方法有：①從_______________中獲取目的基因；②利用__________擴增目的基因。

（2）若目的基因和質粒載體分別用EcoRⅠ酶切，酶切產物用DNA連接酶處理后，兩兩連接對的產物有_________種類型。將上述連接產物導入無任何抗藥性的宿主細胞中，再將這些宿主細胞接種到含四環素的培養基中，能正常生長的宿主細胞所含有的連接產物是__________________________________________________ 。實驗中，為了防止目的基因和質粒載體在酶切后產生的末端發生任意連接，酶切時因選用的酶是_________________。

（3）為大量培養抗旱新品種植物，將基因表達載體構建完成后一般不直接導入農桿菌，而是先將其轉入處于________的大腸桿菌中，導入大腸桿菌的目的是_______________________。

Answer 1

【答案】基因文庫 PCR技術 3 載體--載體連接物(或質粒一質粒連接物) EcoR I和BamH I 感受態 獲取大量重組質粒

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）目前獲取目的基因的常用方法有：從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增。

（2）將含有抗旱基因的DNA與該質粒表達載體分別用EcoRⅠ酶切，酶切產物用DNA連接酶處理后，兩兩連接的產物有3種，即含有耐旱基因的DNA與含有耐旱基因的DNA連接、質粒與質粒連接、含有耐旱基因的DNA與質粒連接。由圖可知，構建基因表達載體時，四環素抗性基因會被破壞，因此將上述連接產物導入無任何抗藥性的宿主細胞后，將這些宿主細胞接種到含四環素的培養基中，能正常生長的宿主細胞所含有的連接產物是載體-載體連接物（或質粒-質粒連接物）。酶切時應選用限制酶EcoRⅠ和BamHⅠ，形成不同的黏性末端，這樣可以防止目的基因和質粒表達載體在酶切后產生的末端發生任意連接。

（3）為大量培養抗旱新品種植物，將基因表達載體構建完成后一般不直接導入農桿菌，而是先將其轉入處于感受態的大腸桿菌中，目的是為了獲取大量重組質粒。