Question

【題目】針對腫瘤細胞相關的異常分子和基因，可設計和研制特異性的靶點藥物，靶向殺傷腫瘤細胞。

（1）下圖所示轉鐵蛋白受體（TfR）與轉鐵蛋白（Tf）結合，通過胞吞方式，將鐵元素運輸至胞內。腫瘤細胞由于增長快速，需要更多的鐵元素，因此腫瘤細胞表面TfR 表達量___________(上升或下降)。利用單克隆抗體技術，可研制相應的抗TfR抗體，它們與TfR特異性結合， _____________進而影響腫瘤細胞增長。

（2）若想獲得單克隆抗體，可將___________的小鼠的B 細胞與___________融合，繼而篩選出_______________的雜交瘤細胞，大量培養獲得相應抗體，由于該抗體來源于小鼠，稱為鼠源單克隆抗體。

（3）將該鼠源單克隆抗體與人癌細胞混合后培養，發現單獨使用抗體對人癌細胞的增殖無顯著影響，可能的原因是抗體與細胞表面TfR結合后___________，為探究該假說成立與否，采用熒光標記定位的方法，結果發現抗體出現在細胞膜上和細胞內，則此實驗結果支持該假說。

（4）由于在本實驗中單獨使用抗體效果不佳，考慮利用抗體介導殺傷細胞對靶細胞的裂解作用來抑制癌細胞，該過程如圖2所示。若無論何種抗體，殺傷細胞都可與之結合，最終使靶細胞裂解死亡，則說明抗體Fc段在不同種類的抗體中_________（相同或不同）。

（5）人的殺傷細胞無法識別鼠源單克隆抗體的Fc段，科學家為此構建了人-鼠嵌合抗體。該過程基本流程排序為__________。

A．逆轉錄獲得Fab基因編碼區

B．從分泌鼠源單克隆抗體的雜交瘤細胞中提取總RNA

C．將其導入細胞中進行表達

D．對基因的表達產物進行鑒定

E．將Fab段的基因編碼區與人的Fc段基因進行拼接，構建含人-鼠嵌合抗體基因的質粒

Answer 1

【答案】上升 阻止了Tf與TfR結合，抑制鐵元素的攝取 免疫接種過TfR 骨髓瘤細胞 既能無限增殖又能分泌抗體 同樣會被內吞進細胞；TfR 最終會返回細胞膜表面，以至于抗體無法達到抑制細胞鐵攝取的目的，所以無法影響細胞增長 相同 BAECD

【解析】

1、單克隆抗體的制備過程是：對小動物注射抗原，從該動物的脾臟中獲取效應B細胞，將效應B細胞與骨髓瘤細胞融合，篩選出能產生單一抗體的雜交瘤細胞，克隆化培養雜交瘤細胞（體內培養和體外培養），最后獲取單克隆抗體。

2、基因工程的基本步驟：①目的基因的獲��；②基因表達載體的構建；③目的基因導入受體細胞；④目的基因的檢測與鑒定。

3、人工合成基因的方法主要有兩條途徑，一條途徑是以目的基因轉錄成的mRNA為模版，反轉錄成互補的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需要的基因。另一條途徑是根據已知的蛋白質的氨基酸序列，推測出相應的mRNA序列，然后按照堿基互補配對的原則，推測出它的基因的核苷酸序列，再通過化學方法，以脫氧核苷酸為原料合成目的基因。

（1）腫瘤細胞表面TfR表達量增多，能夠與Tf結合，運輸更多的鐵元素，適應腫瘤細胞的快速增長�？�TfR抗體與TfR特異性結合，阻斷了與Tf的結合途徑，鐵元素運輸受阻，腫瘤的生長受到抑制。

（2）若要獲得抗TfR的單克隆抗體，可將接種過TfR的免疫小鼠的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，繼而篩選出既能無限增殖又能分泌抗TfR抗體的雜交瘤細胞，大量培養獲得該抗體。

（3）抗體與細胞表面TfR結合后，同樣會被內吞進細胞，TfR最終會返回細胞膜表面，以至于抗體無法起到抑制細胞鐵攝取的目的，所以無法影響細胞增長。

（4）由圖可知，殺傷細胞與抗體的Fc段結合，若無論何種抗體，殺傷細胞都可與之結合，說明抗體Fc段在不同種類的抗體中相同。

（5）由分析中基因工程的基本操作流程可知，構建了人-鼠嵌合抗體過程基本流程排序為BAECD。