Question

【題目】某質粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制酶切割位點，同時還含有抗四環素基因和抗氨芐青霉素基因．利用此質粒獲得轉基因抗鹽煙草的過程如圖所示，請回答下列問題．
（1）抗鹽某因是否在煙草細胞中穩定遺傳的關鍵是 ．
（2）在構建重組質粒時，應選用和兩種酶對目的基因和質粒進行切割，以保證重組DNA序列的唯一性．
（3）將目的基因導入植物細胞采用最多的方法是農桿菌轉化法．含有目的基因的農桿菌可根據標記基因進行篩選．若農桿菌在含有氨芐青霉素和四環素的培養基上都可以生長繁殖，農桿菌中是否己含有目的基因？（是/否）．為什么？ ．
（4）愈傷組織經形成完整植株，這一過程需要再轉接到培養基上進行培養，該過程的實質是 ．

Answer 1

【答案】
（1）抗鹽基因（目的基因）是否插入到煙草的染色體DNA上
（2）HindⅢ； SalⅠ
（3）否；含有目的基因的質�？顾沫h素的基因被破壞
（4）再分化；分化；基因的選擇性表達
【解析】解：（1）抗鹽某因是否在煙草細胞中穩定遺傳的關鍵是抗鹽基因（目的基因）是否插入到煙草的染色體DNA上．（2）質粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三種限制酶切割位點，其中BamHI的切割位點位于目的基因上，用該酶切割會破壞目的基因；若只用SalI一種限制酶切割可能會導致目的基因與運載體反向連接；因此在構建重組質粒時，應選用SalI和HindIII兩種限制酶對質粒和含有抗鹽基因的DNA進行切割，以保證重組DNA序列的唯一性．（3）構建基因表達載體時，抗四環素基因被破壞，但抗氨芐青霉素的基因沒有被破壞，因此含有重組質粒的農桿菌在含有四環素的培養基上不能生存，但在含有氨芐青霉素的培養基上能生存．（4）植物組織培養包括脫分化和再分化兩個階段，脫分化形成的愈傷組織需經再分化形成完整植株，這一過程需要再轉接到分化培養基上進行培養；細胞分化的實質是基因的選擇性表達．

所以答案是：（1）抗鹽基因（目的基因）是否插入到煙草的染色體DNA上（2）HindⅢSalⅠ（3）否 含有目的基因的質�？顾沫h素的基因被破壞（4）再分化 分化 基因的選擇性表達

【考點精析】利用基因工程的原理及技術對題目進行判斷即可得到答案，需要熟知基因工程的原理是利用DNA重組技術．