Question

【題目】目的基因的分離、克隆以及目的基因的結構與功能研究，一般位于整個基因工程的上游。將含有某種生物不同基因的許多DNA片段導入受體菌的群體中儲存，可獲得該種生物的基因文庫。請回答下列問題：

（1）目的基因可以在構成基因文庫的受體菌中____________________。從基因多少的角度分析，cDNA文庫含有某種生物的__________。

（2）區別于基因組文庫，在構建cDNA文庫時需要用到__________酶，從cDNA文庫中獲得的目的基因__________（填“不含有”或“含有”）啟動子。

（3）從基因文庫中提取目的基因比較復雜，下圖為一種思路：

該過程中需將纖維素膜上的細菌裂解，其目的是____________，再用32P標記的____________作為探針進行雜交。依據雜交結果，進一步操作為__________________________，才能獲得含有目的基因的受體菌。

Answer 1

【答案】穩定存在并遺傳 部分基因 逆轉錄 不含有 釋放出DNA 目的基因 選取培養基上的a菌落繼續培養

【解析】

1、基因文庫包括基因組文庫和部分基因文庫。其中基因組文庫包含某種生物所有的基因，而部分基因文庫只包含某種生物的部分基因，如：cDNA文庫。

2、以mRNA為模板，經反轉錄酶催化，在體外反轉錄成cDNA，與適當的載體（常用噬菌體或質粒載體）連接后轉化受體菌，則每個細菌含有一段cDNA，并能繁殖擴增，這樣包含著細胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織細胞的cDNA文庫。

3、基因組文庫與cDNA文庫比較：

文庫類型	cDNA	基因組文庫
文庫大小	小	大
基因中啟動子	無	有
基因中內含子	無	有
基因多少	某種生物的部分基因	某種生物的全部基因
物種間的基因交流	可以	部分基因可以

（1）目的基因可以在構成基因文庫的受體菌中穩定存在并遺傳�；�因組文庫包含某種生物所有的基因，而部分基因文庫只包含某種生物的部分基因，如cDNA文庫。

（2）區別于基因組文庫，在構建cDNA文庫時需要用到逆轉錄酶，由于cDNA文庫中的目的基因是mRNA逆轉錄形成的，故不含有啟動子。

（3）由于目的基因存在于菌體中，所以上述過程需將纖維素膜上的細菌裂解，其目的是釋放出DNA，再用32P標記的目的基因作為探針進行雜交。依據雜交結果，a菌落的細菌DNA中出現了雜交帶，說明a菌體中含有目的基因，可選取培養基上的a菌落繼續培養，才能獲得含有目的基因的受體菌。