Question

【題目】為了分離和純化高效分解石油的細菌，科研人員利用被石油污染過的土壤進行了如圖1所示的實驗。請據圖回答：

（1）步驟③的培養基成分與普通液體培養基相比，最大的區別是步驟③培養基中以_________為唯一碳源。從功能上講，步驟③中使用的培養基屬于________培養基。

（2）步驟④中使用的培養基中常常要加入________作為凝固劑；接種時，若在培養基表面連續進行4次劃線（如圖2），則需要對接種環灼燒________次。

（3）為了對石油分解菌進行計數，采用________法，得到了如圖3所示的平板。運用這種方法統計的菌落數往往比活菌的實際數目________（填偏高或偏低）。

（4）實驗結束后，使用過的培養基應該進行________處理后才能倒掉。若想要長期保存優質菌種，可以采用________的方法。

Answer 1

【答案】石油 選擇 瓊脂 5 稀釋涂布分離 偏低 滅菌 甘油管藏

【解析】

從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養、梯度稀釋、涂布培養和篩選菌株。篩選菌株的過程要使用選擇培養基，操作過程中要注意無菌操作，常用的固體培養基上接種方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法。微生物計數可用稀釋涂布平板法和血球計數板計數法。

（1）步驟③的培養基成分是篩選能分解石油的培養基，與普通液體培養基相比，最大的區別是步驟③培養基中以石油為唯一碳源。從功能上講，步驟③中使用的培養基屬于選擇培養基，能分解石油的細菌能夠生長，其它菌不能生長。

（2）步驟③中使用的培養基中常常要加入瓊脂作為凝固劑。在每次劃線前后都要對接種環進行滅菌，因此按照圖中劃線順序進行4次劃線，整個劃線過程中需要對接種環進行灼燒的次數為5次。

（3）為了對石油分解菌進行計數，采用稀釋涂布分離法，得到了如圖3所示的平板。由于稀釋難度大，常有菌落的重疊，運用這種方法統計的菌落數往往比活菌的實際數目偏低。

（4）實驗結束后，為避免二次污染，使用過的培養基應該進行滅菌處理后才能倒掉。甘油管冷凍保藏法是利用微生物在甘油中生長和代謝受到抑制的原理達到保藏目的，若想要長期保存優質菌種，可以采用甘油管藏的方法。