Question

【題目】枯草芽孢桿菌產生的蛋白酶在醫藥和化工等領域具有重要的價值。為篩選蛋白酶產量高的枯草芽孢桿菌菌株，分別將浸過不同菌株的提取液（a~e）及無菌水（f）的無菌圓紙片置于平板培養基表面，在37 ℃恒溫箱中放置2~3天，結果如圖所示。請回答問題：

（1）在培養包括枯草芽孢桿菌在內的異養型微生物時，培養基營養成分應包括水和_______________，配制圖1培養基的基本步驟是計算→稱量→_____→滅菌→倒平板。

（2）a~e中蛋白酶產量最高的菌株是__（用字母回答），判斷依據是________________。

（3）分離和純化枯草芽孢桿菌可用稀釋涂布平板法。在進行稀釋涂布平板操作時，要將菌液進行一系列的_____________，涂布時，要將涂布器末端浸在盛有體積分數為______的燒杯中。

（4）工業上生產堿性蛋白酶成本高，目前可以采用___________技術多次重復使用以降低成本。

Answer 1

【答案】無機鹽、碳源、氮源 溶化 a a周圍的透明圈最大，說明其產生的蛋白酶數量多 梯度稀釋 70%的酒精 固定化酶

【解析】

1、稀釋涂布法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，在適宜條件下培養。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落。

2、微生物的營養成分主要有：碳源、氮源、水和無機鹽等。大多數微生物是異養生物，在培養微生物時需要滿足其生長的溫度、pH和氧氣等條件。

3、由于細胞相對于酶來說更大，難以被吸附或結合，因此多采用包埋法；由于酶小，容易從包埋的材料中漏出，采用物理吸附法和化學結合法。

（1）微生物的營養成分主要有：碳源、氮源、水和無機鹽等，培養基的基本步驟是計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。

（2）圖中a~e中，a周圍的透明圈最大，說明其產生的蛋白酶數量多，故蛋白酶產量最高的菌株是a。

（3）在進行稀釋涂布平板法操作時，首先要將菌液進行一系列的梯度稀釋；進行涂布平板操作前，要對涂布器進行滅菌，一般做法是先將涂布器浸在盛有70%酒精的燒杯中，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。

（4）生產堿性蛋白質酶成本高，目前可以采用固定化酶技術多次重復使用酶以降低成本，該技術常使用方法是化學結合法和物理吸附法。