Question

【題目】酵母菌生長的最適宜溫度在20～30℃之間，能在pH為3～7.5的范圍內生長，在氧氣充足的環境中主要以出芽生殖的方式快速增殖。大約每1.5～2小時增殖一代。某研究性學習小組據此探究酵母菌種群在不同的培養液濃度和溫度條件下種群密度的動態變化，進行了如下實驗，實驗操作步驟如下：

第一步：配制無菌馬鈴薯葡萄糖培養液和活化酵母菌液。

第二步：利用相同多套裝置，在適宜條件下培養。

第三步：用血球計數板計數裝置中起始酵母菌數目，做好記錄。

第四步：將各裝置放在其他條件相同且適宜的條件下培養。

第五步：連續7天，每天隨機抽時間取樣計數，做好記錄。

回答下列問題：

（1）改正實驗操作步驟中的一處錯誤：_____________________________________。

（2）某同學第5天在使用血球計數板計數時做法如下：

①搖勻試管，取1mL培養液并稀釋10倍（稀釋樣液的無菌水中加入了幾滴臺盼藍染液）。

②先將__________放在計數室上，用吸管吸取稀釋后的培養液滴于其邊緣，讓培養液自行滲入，多余培養液用濾紙吸去，制作好臨時裝片。

③顯微鏡下觀察計數：在觀察計數時只記______（填“被”或“不被”）染成藍色的酵母菌。

（3）若在顯微鏡下觀察計數某一小方格時，活菌分布如下圖所示，則記錄的數目是___________個。若平均每個樣方中的酵母菌數目就是該數目，所使用的血球計數板有16個中方格，每1中方格中有25個小方格，每1個大方格容積為0.1mm3（1mL=1 000mm3）。則酵母菌細胞個數/mL=___________________。

（4）在實驗過程中，培養液的pH值變化為______________。

（5）實驗結束后，用試管刷蘸洗滌劑擦洗血球計數板的做法是錯誤的，正確的方法是________________________。

Answer 1

【答案】第五步中應每天同一時間取樣 蓋玻片 不被 8 3.2×108 逐漸變小 浸泡和沖洗

【解析】

1、探究培養液中酵母菌種群數量的動態變化實驗的原理：

（1）在含糖的液體培養基（培養液）中酵母菌繁殖很快，迅速形成一個封閉容器內的酵母菌種群，通過細胞計數可以測定封閉容器內的酵母菌種群隨時間而發生的數量變化。

（2）養分、空間、溫度和有毒排泄物等是影響種群數量持續增長的限制因素，細菌在一定體積培養液中的增長如圖所示：

。

2、通過建立反映種群動態變化的數學模型，分別說明種群個體數量的增長規律以及種群外部環境因素和種群內部因素對種群個體數量的制約．
血球計數板有16個中方格，每l中方格中有25個小方格，即總共有16×25=400個小方格。計數室的容積為0.1mm3（1mL=1000mm3），每個小方格的體積為mm3，；酵母細胞個數/1mL=平均每個小方格的酵母菌數÷每1個小方格容積×稀釋倍數=平均每個小方格的酵母菌數×400×104×稀釋倍數。

（1）第五步中“每天隨機抽時間取樣計數”應改為“每天同一時間（定時）取樣”，這樣每天取樣時間間隔相同，是所得的實驗數據更加準確，畫出的變化曲線更加具有參考價值。

（2）②在對酵母菌數量進行抽樣檢測時，首先振蕩搖勻試管，取1mL培養液并適當稀釋，然后將蓋玻片放在計數室上，用吸管吸取稀釋后的培養液滴于其邊緣，讓培養液自行滲入，多余培養液用濾紙（吸水紙）吸去，制作好臨時裝片。

③在顯微鏡下觀察計數時，由于死的酵母菌細胞膜失去選擇透過性，所以被染成藍色，而活的酵母菌不會被染色，因此計數時只記不被染成藍色的酵母菌。

（3）已知所使用的血球計數板有16個中方格，每l中方格中有25個小方格，每1個小方格容積為0.1mm3（1mL=1000mm3）。據圖分析可知每個小方格平均有8個酵母菌，則1mL培養液中酵母細胞個數=平均每個小方格的酵母菌數÷每1個小方格容積×稀釋倍數=平均每個小方格的酵母菌數×400×104×稀釋倍數=8×400×104×10=3.2×108。

（4）在實驗過程中，由于酵母菌呼吸產生二氧化碳，所以培養液的pH值會逐漸變小。

（5）實驗結束后，血球計數板應該進行浸泡和沖洗，而不能用試管刷蘸洗滌劑擦洗。