Question

【題目】自然界中的微生物往往是混雜生長的。人們在研究微生物時一般要將它們分離提純，然后進行數量的測定。下面是對大腸桿菌進行數量測定的實驗，請回答有關問題。步驟如下：

（1）制備稀釋倍數范圍為__________________________的系列稀釋液。

（2）下圖中A、B兩種接種方法，常用來統計樣品活菌數目的方法是[ ]_______________________。

（3）適宜溫度下培養。

①為測定大腸桿菌數，在對應稀釋倍數為106的培養基中，得到以下幾種統計結果，正確可信的是____________。

A.一個平板，統計的菌落數是23

B.兩個平板，統計的菌落數是22和26，取平均值24

C.三個平板，統計的菌落數分別為21、5和52，取平均值26

D.四個平板，統計的菌落數分別是21、30、24和25，取平均值25

②一同學在對應稀釋倍數為106的培養基中，測得平板上菌落數的平均值為23.4，那么每毫升樣品中的菌落數是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.05mL）________________________。

Answer 1

【答案】103-107 A稀釋涂布平板法 D 4.68108

【解析】

微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。

1、平板劃線法通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。在數次劃線后，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的菌落。

2、稀釋涂布平板法則是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，進行培養。在稀釋度足夠高的菌液里，微生物被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落。通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。

（1）制備稀釋倍數范圍為103、104、105、106、107的系列稀釋液。

（2）由A圖可知，菌落隨機分布在培養基表面，故圖中A表示的是稀釋涂布平板法。由B圖可知，從第1區域到第5區域菌落數逐漸減少，故圖中B表示的是平板劃線法。其中，常用稀釋涂布平板法來統計樣品活菌數目，即圖中的A。

（3）①為了避免偶然性因素的影響，使結果接近真實值，應設置三個或三個以上的平板，計算出菌落平均。A中只有一個平板，B中只有兩個平板，統計結果不可信，AB錯誤。計算時，明顯偏離實際值（可參照本組實驗其他平板的計數值）的應舍棄后再求平均值，C中菌落數為5和52的平板明顯偏離實際值，應舍棄，舍棄后只剩下一個平板，統計結果不可信，C錯誤；D中四個平板上的菌落數相差不大，且沒有明顯偏離實際值，故D的統計結果可信，D正確。

②每毫升樣品中的菌落數=C/V×M=23.4÷0.05×106=4.68108個。