Question

【題目】普通煙草轉入抗鹽基因培育抗鹽煙草的過程如圖所示．已知含抗鹽基因的DNA和質粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位點，質粒上另有抗四環素基因和抗氨芐青霉素基因．

（1）構建重組質粒時，應選用限制酶______對______進行切割，以保證它們定向連接．限制酶切斷的是DNA分子中特定部位的兩個脫氧核苷酸之間的鍵，具體說就是______和______之間的鍵。

（2）如果目的基因直接注入煙草細胞，一般會被煙草細胞______．質粒的作用是______。

（3）切割后的目的基因與質粒由______酶連接成重組質粒．篩選導入重組質粒的細菌，應在其培養基中加入______，理由是______。

（4）從個體水平鑒定抗鹽轉基因煙草是否培育成功的方法是______。

Answer 1

【答案】salⅠ、HindⅢ酶 含抗鹽基因的DNA和質粒進行切割 脫氧核糖 磷酸 核酸酶分解 運載體 DNA連接 分別加入氨芐青霉素、四環素 添加青霉素的培養基中成活，四環素中不成活的為重組質粒．因為重組質粒帶有抗氨芐青霉素基因，而四環素基因被破壞 用一定濃度鹽水澆灌或移栽到鹽堿地中

【解析】

圖示為轉基因抗鹽煙草的培育過程，首先構建基因表達載體；其次采用農桿菌轉化法將目的基因導入受體細胞（煙草細胞）；再采用植物組織培養技術將含有目的基因的煙草細胞培養成轉基因抗鹽煙草。

（1）分析題圖可知，構建重組質粒時，應選用salⅠ酶和HindⅢ酶對含抗鹽基因的外源DNA和質粒進行切割，這樣會形成不同的黏性末端，可以防止目的基因、質粒的自身連接，以保證目的基因和質粒的定向連接。限制酶切斷的是DNA分子中特定部位的兩個脫氧核苷酸之間的鍵，具體說就是脫氧核糖和磷酸之間的磷酸二酯鍵。

（2）如果目的基因直接注入煙草細胞，一般會被煙草細胞核酸酶分解，質粒一般作為基因工程的運載體。

（3）切割后的目的基因與質粒由DNA連接酶連接成重組質粒。篩選導入重組質粒的細菌，應在其培養基中分別加入氨芐青霉素、四環素，添加青霉素的培養基中成活，四環素中不成活的為重組質粒。因為重組質粒帶有抗氨芐青霉素基因，而四環素基因被破壞。

（4）從個體水平鑒定抗鹽轉基因煙草是否培育成功的方法是用一定濃度鹽水澆灌或移栽到鹽堿地中。