Question

【題目】I．基因工程操作步驟中，需要從受體細胞群中篩選出已獲得目的基因的細胞，圖中①-③示一種篩選方法的過程。pBR322質粒含有兩個抗性基因，分別是Amp（氨芐青霉素）抗性基因和Tet（四環素）抗性基因，其中在Tet抗性基因上有下列目的基因的插入位點（插入將導致Tet抗性基因功能性失活），請回答：

（1）圖中①過程所需的酶是___________________。

（2）經過①過程，pBR322質�？赡艹霈F的兩種結果A是_______________________。

（3）②過程表示用含四環素（使細胞停止生長，但不致死）和環絲氨酸（使生長的細胞致死）的培養基中培養細菌甲，則培養結果C表示在培養基中可能存活的細菌包括_________________。

（4）若要進一步篩選出符合要求的受體細胞D，則③過程需要做的處理是（請參照過程②的方法）___________________________________________________。

II．基因工程中使用的II型限制性核酸內切酶通�？梢宰R別長度為4-8個核苷酸的特異序列。下面示限制酶Sau3A I對DNA片段切割的結果。

……CAATGATCTCCTA…… Sau3A I ……CAAT + GATCTCCTA……

……GTTACTAGAGGAT…… ……GTTACTAG AGGAT……

（5）請分析，Sau3AI的識別序列以及切割位點（用“↓”表示）是______________。

III．下表列出了幾種限制酶的識別序列及其切割位點，圖1（含兩個抗性基因的質粒）和圖2（含目的基因的外源DNA）中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。

限制酶	XhoI	BclI	SalI	BamHI	XbaI
識別序列及酶切位點	C↓TCGAG	T↓GATCA	G↓TCGAC	G↓GATCC	T↓CTAGA

（6）據圖1和圖2分析，為了使目的基因和質粒實現定向連接和便于受體細胞的篩選，切割質粒的限制酶應選用_______________，切割含目的基因的外源DNA的酶應選用________________。

Answer 1

【答案】DNA連接酶（DNA連接酶和限制酶） 目的基因成功插入（重組質粒）、目的基因插入不成功（沒有發生重組的質粒） 導入不成功的細菌和導入了重組質粒的細菌 將存活的細菌轉移到含氨芐青霉素的培養基上培養 XbaⅠ和BclⅠ XbaⅠ和BclⅠ

【解析】

I．(1)圖中①過程為構建基因表達載體過程，需要DNA連接酶和限制酶兩種工具酶；

（2）經過②過程，pBR322質�？赡艹霈F的兩種結果，即A是兩種質粒：重組質粒（目的基因成功插入）、沒有發生重組的質粒（目的基因插入不成功）。

（3）②過程表示用含四環素（使細胞停止生長，但不致死）和環絲氨酸（使生長的細胞致死）的培養基中培養細菌甲，根據題干可知，在該培養基上成活的細菌是導入不成功的細菌和導入了重組質粒的細菌。

（4）若要進一步篩選出符合要求的受體細胞D，則③過程需要做的處理是：將存活的細菌轉移到含氨芐青霉素的培養基上培養。

II．（5）據圖分析可知，Sau3AI的識別序列以及切割位點是 。

III．（6）據圖1和圖2分析，為了使目的基因和質粒實現定向連接和便于受體細胞的篩選，切割質粒的限制酶應選用XbaⅠ和BclⅠ，切割含目的基因的外源DNA的酶應選用XbaⅠ和BclⅠ。