Question

【題目】A．隨著全球環境污染嚴重，石油資源逐步減少，近年來乙醇等“綠色能源”的開發備受關注�？萍脊ぷ髡哐兄瞥隼�用秸稈生產燃料酒精的技術，大致流程如下圖所示。

（1）若要從土壤中分離出能分解植物秸稈的微生物，培養基中的碳源是____________,對該培養基可采取________________的方法進行滅菌。

（2）某同學對分離得到的微生物培養液進行數量測定,在稀釋倍數為105對應的培養基中測定平板上菌落數的平均值為23．4，則每毫升樣品中的細菌數是（涂布平板時稀釋液的體積為0．2mL）_________________。

（3）用上述方法測定目的菌的密度，實際活菌數量要比測得的菌落數量多，原因是________________。

（4）上述流程圖中，糖液發酵產生酒精需要的菌種是_________________，酒精是在目的菌的________（結構）中產生的。

B．馬鈴薯塊蓮含有大量的淀粉，富含多種維生素和無機鹽，我國已將馬鈴薯作為主糧產品進行產業化開發。下圖是轉基因抗鹽馬鈴薯的培育過程，請分析回答問題：

（1）為獲取抗鹽基因,可以從堿蓬細胞研磨液中提取抗鹽基因的___________來合成cDNA。

（2）上圖構建基因表達載體時，最好選用___________酶切割含目的基因的外源DNA和質粒，不能使用Sma I切割的原因是_______________。構建好的重組質粒在抗鹽基因前要加上特殊的啟動子，啟動子是一段有特殊結構的___________片段。

（3）將基因表達載體導入農桿菌中的Ti質粒上的T—DNA上的原因是__________。通過農桿菌的轉化作用，使抗鹽基因插入到馬鈴薯細胞中的染色體DNA上，從而使抗鹽基因的遺傳特性得以__________。

（4）上圖轉基因抗鹽馬鈴薯培育過程中，屬于脫分化階段的是_____________（填序號）。從個體水平上檢驗轉基因抗鹽馬鈴薯是否培育成功的方法是____________。

Answer 1

【答案】A．（1）纖維素 高壓蒸汽滅菌

（2）1．17×107

（3）當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的是一個菌落

（4）酵母菌 細胞質基質

B．（1）mRNA

（2）EcoRI和HindIII SmaI會破壞質粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因 DNA

（3）T—DNA是可以轉移的DNA （T一DNA能攜帶目的基因整合到受體細胞染色體的DNA ） 穩定維持和表達

（4）⑤ 將轉基因馬鈴薯幼苗栽種在鹽堿地或較高濃度鹽溶液中，觀察是否能正常生

【解析】A．（1）篩選目的微生物需要使用選擇培養基，培養基中的碳源為纖維素，培養基需要進行高壓蒸汽滅菌法滅菌．

（2）根據題意可知，每毫升樣品中的菌落數是23．4×105÷0．2=1．17×107．

（3）用稀釋涂布平板法進行微生物計數時，當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的是一個菌落，所以實際活菌數量要比測得的菌落數量多．

（4）上述流程圖中，發酵階段需要的菌種是酵母菌，酵母菌無氧呼吸可以產生酒精，生產酒精要控制的必要條件是無氧，無氧呼吸的場所是細胞質基質．

B．（1）獲取目的基因時，可以以mRNA為模板逆轉錄合成cDNA．

（2）用SamⅠ酶切割會破壞質粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因，因此構建基因表達載體時不能用SamⅠ酶；因此，為了防止目的基因或質粒自身環化，在構建基因表達載體時，最好選用EcoRⅠ和HindⅢ酶切割含目的基因的外源DNA和質粒．啟動子是一段有特殊結構的DNA片段，是RNA聚合酶結合的部位．

（3）將基因表達載體導入農桿菌中的Ti質粒上的T﹣DNA上的原因是T﹣DNA是可以轉移的DNA（T﹣DNA能攜帶目的基因整合到受體細胞染色體的DNA上）．通過農桿菌的轉化作用，使抗鹽基因插入到馬鈴薯細胞中的染色體DNA上，從而使抗鹽基因的遺傳特性得以穩定維持和表達．

（4）圖中⑤屬于脫分化階段．從個體水平上檢驗轉基因抗鹽馬鈴薯是否培育成功的方法是將轉基因馬鈴薯幼苗栽種在鹽堿地或較高濃度鹽溶液中，觀察是否能正常生長．