Question

【題目】為了提高菊花抗凍能力，研究者從其他生物中克隆出抗凍基因C（圖1），擬將其導入菊花中�；卮鹣铝袉栴}：

（1）基因工程中，構建重組質粒時需要用到的工具酶有：____________________。為使抗凍基因C在菊花細胞中高效表達，需要把目的基因片段插入表達載體的__________和__________之間。

（2）若想了解 C基因是否整合到菊花染色體上，檢測方法是采用______________技術。

（3）若獲得的轉基因植株（抗凍基因C已經整合到菊花的基因組中）抗凍能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是__________________________。

（4）借助農桿菌將重組質粒導入菊花細胞，在該過程中需添加酚類物質，目的是______________________________�？箖龌�因C的遺傳特性能在菊花體內穩定存在的關鍵是______________________________。

Answer 1

【答案】限制性核酸內切酶（限制酶）和DNA連接酶 啟動子 終止子 DNA分子雜交 目的基因的轉錄或翻譯異常 吸引農桿菌感染菊花細胞（促進轉化） 目的基因已插入到菊花細胞的染色體DNA上

【解析】

基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）構建重組質粒時，首先要用同種限制酶切割外源DNA和運載體，其次要用DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組質粒；啟動子和終止子是調控基因表達的重要控件，因此為使抗凍基因C在菊花細胞中高效表達，需要把目的基因片段插入表達載體的啟動子和終止子之間。
（2）檢測目的基因是否插入受體細胞的染色體上，可采用DNA分子雜交技術。
（3）基因表達包括轉錄和翻譯兩個過程，因此若獲得的轉基因植株（抗凍基因C已經整合到菊花的基因組中）抗凍能力沒有提高，其可能的原因是目的基因的轉錄或翻譯異常。
（4）借助農桿菌將重組質粒導入菊花細胞，在該過程中需添加酚類物質，目的是吸引農桿菌感染菊花細胞（促進轉化）�？箖龌�因C的遺傳特性能在菊花體內穩定存在的關鍵是目的基因已插入到菊花細胞的染色體DNA上。