Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞�？蒲腥藛T利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療。其技術流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應去除卵母細胞的 。

（2）步驟②中，重組胚胎培養到 期時， 可從其內細胞團分離出ES細胞。

（3）步驟③中，需要構建含有Rag2基因的表達載體。可以根據Rag2基因的 設計引物，利用PCR技術擴增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有 酶的酶切位點。

（4）為檢測Rag2基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的 ，用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交實驗。

Answer 1

【答案】（1）細胞核 （2）囊胚 （3）核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ （4）蛋白質

【解析】本題以胚胎干細胞培養為背景，考查了核移植、動物細胞培養、基因工程相關知識。（1）核移植是將體細胞核移植到去核的卵母細胞中，所以實驗前要去除卵母細胞的細胞核。（2）內細胞團位于囊胚中，所以重組胚胎培養到囊胚期。（3）設計引物要遵循堿基互補配對原則，所以根據Rag2基因的核苷酸序列進行設計。Rag2基因基因是用HindⅢ和PstⅠ限制酶切割獲得，所以表達載體上應具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點。（4）基因表達的產物是蛋白質，所以提取小鼠骨髓細胞的蛋白質進行抗原－抗體雜交。