Question

【題目】圓褐固氮菌能將大氣中的氮氣轉化為氨，是異養需氧型的原核生物。某同學利用稀釋涂布平板法從土壤中分離獲得圓褐固氮菌�；卮鹣铝袉栴}。

（1）圓褐固氮菌與硝化細菌在同化作用過程上的最主要區別在于圓褐園氮菌_____。培養圓褐固氮菌時不能隔絕空氣，其原因是__________(答出兩點)。

（2）稀釋涂布平板法常用來統計樣品中活菌的數目，分離不同的微生物需要不同的稀釋倍數，原因是_______________________________________________。

（3）工作者將三個接種了等量同樣稀釋倍數培養液的培養基置于37°C的恒溫箱中培養。24h后觀察到三個平板上的菌落數目分別為19、197、215，該結果出現的可能原因是__________________。為獲得更科學的三個平板上的數據，請提出解決方案：________________________。

（4）若用固定化酶技術固定圓褐固氮菌產生的固氮酶，和一般酶制劑相比，其優點是_________，且利于產物的純化；固定化目的菌細胞常用______法固定化。

Answer 1

【答案】不能將CO2轉化為含碳有機物 圓褐固氮菌為需氧型生物，且其需要空氣中的氮氣作為氮源 (單位質量)土壤中不同種類的微生物數量不同 涂布第一個平板時涂布器未冷卻就涂布平板 重做實驗 可重復利用；既能與反應物接觸，又能與產物分離 包埋

【解析】

稀釋平板計數是根據微生物在固體培養基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養特征設計的計數方法，即一個菌落代表一個單細胞。計數時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養基內。經培養后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統計菌落數目，即可計算出樣品中的含菌數。此法所計算的菌數是培養基上長出來的菌落數，故又稱活菌計數。一般用于某些成品檢定（如殺蟲菌劑等）、生物制品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗。

（1）硝化細菌屬于自養型細菌，可以利用化學反應放出的能量將CO2還原為糖類。圓褐固氮菌能將大氣中的氮氣轉化為氨，是異養需氧型的原核生物。圓褐固氮菌與硝化細菌在同化作用過程上的最主要區別在于圓褐園氮菌不能將CO2轉化為含碳有機物。培養圓褐固氮菌時不能隔絕空氣，其原因是圓褐固氮菌為需氧型生物，且其需要空氣中的氮氣作為氮源。

（2）稀釋涂布平板法常用來統計樣品中活菌的數目，(單位質量)土壤中不同種類的微生物數量不同，因此分離不同的微生物需要不同的稀釋倍數。

（3）三個平板上的菌落數目分別為19、197、215，19這個結果特別少偏離正常，該結果出現的可能原因是涂布第一個平板時涂布器未冷卻就涂布平板。因為含有19這個異常數據，為獲得更科學的三個平板上的數據，只能重做實驗。

（4）固定化酶是將水溶性酶用物理或化學方法處理，使之成為不溶于水的，但仍具有酶活性的狀態的一種技術。一般酶制劑和產物混合在一起，難分離，且再次利用變得困難，固定化酶技術固定圓褐固氮菌產生的固氮酶，其優點是可重復利用；既能與反應物接觸，又能與產物分離，且利于產物的純化。目的菌體積較大，固定化目的菌細胞常用包埋法固定化。