Question

【題目】干擾素是用于治療病毒感染和癌癥的免疫活性蛋白質，若人的干擾素基因在大腸桿菌內表達，產生的抗病毒性較低且保存困難，若將第17位的半胱氨酸改造為絲氨酸，則生產出的干擾素的抗病毒性是原來的100倍，且可在70℃條件下保存半年，下圖是構建干擾素工程菌的過程示意圖�；卮鹣铝袉栴}。

（1）③過程將B導入大腸桿菌，需用____________對大腸桿菌進行處理，使其處于_________態。

（2）要檢測B是否導入大腸桿菌，將③過程后的大腸桿菌先接種于含_________的培養基上，然后將在該培養基上生長的大腸桿菌接種在含_______的培養基上，在前者培養基上能生長而在后者培養基上不能生長的是導入B的工程菌。

（3）基因工程自20世紀70年代興起之后，在短短40年間得到了飛速發展，目前成為生物科學核心技術，在農牧業、工業、環境、能源和醫藥衛生等方面展示出美好的前景，據相關資料回答下列有關問題：

上面是轉基因抗凍番茄培育過程的部分示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），甲、乙表示相關結構或細胞。PstI酶和SmaI酶切割基因后將產生不同的黏性末端。圖中甲代表的是____________，可用____________和____________提取魚的抗凍蛋白基因以避免目的基因末端發生任意連接，用此二酶切割質粒產生的DNA片段有____________種。

Answer 1

【答案】Ca2+ 感受 氨芐青霉素 四環素 重組質粒 PstⅠ酶 SmaⅠ酶 2

【解析】

基因工程的操作步驟包括：目的基因的獲取、基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與鑒定。分析圖示構建干擾素工程菌的過程：利用①蛋白質工程獲得改造后的干擾素基因，然后②過程將基因插入質粒A（載體）的a位點處，獲得含干擾素基因的基因表達載體B，然后利用③感受態細胞法將其導入大腸桿菌受體細胞，經過檢測和篩選獲得干擾素工程菌。

（1）③過程利用感受態細胞法將B導入大腸桿菌，需用Ca2+對大腸桿菌進行處理，使其處于感受態，能吸收周圍環境中的DNA分子。

（2）由于干擾素插入到a位點，破壞了質粒A的四環素抗性基因，而抗氨芐青霉素基因未破壞，可將③過程后的大腸桿菌先接種于含氨芐青霉素的培養基上，然后將在該培養基上生長的大腸桿菌接種在含四環素的培養基上，在前者培養基上能生長而在后者培養基上不能生長的是導入B的工程菌。

（3）分析圖示可知，①過程為基因表達載體的構建，②過程為將目的基因導入受體細胞。圖中甲代表的是重組質粒，PstⅠ酶和SmaⅠ酶切割基因后將產生不同的黏性末端，因此可用PstⅠ酶和SmaⅠ酶提取魚的抗凍蛋白基因以避免目的基因末端發生任意連接，圖示質粒中含有PstⅠ酶和SmaⅠ酶的酶切位點各1個，因此用此二酶切割質粒產生的DNA片段有2種。