Question

（08海南卷）

圖為某種質粒表達載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，amp^R為青霉素抗性基因，tct^R為四環素抗性基因，P為啟動因子，T為終止子，ori為復制原點。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內的多種酶的酶切位點。

（1）將含有目的基因的DNA與質粒表達載體分別用EcoRI酶切，酶切產物用DNA連接酶進行連接后，其中由兩個DNA片段之間連接形成的產物有          、          、         三種。若要從這些連接產物中分離出重組質粒，需要對這些連接產物進行                  。

（2）用上述3種連接產物與無任何抗藥性的原核宿主細胞接種到含四環的培養基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是                  ；若接種到含青霉素的培養基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是               。

（3）目的基因表達時，RNA聚合酶識別和結合的位點是              ，其合成的產物是         。

（4）在上述實驗中，為了防止目的基因和質粒表達載體在酶切后產生的末端發生任意連接，酶切時應選用的酶時                     。

Answer 1

答案：

（1）目的基因―載體連接物  載體--載體連接物  目的基因--目的基因連接物  分離純化

（2）載體--載體連接物；目的基因--載體連接物、載體--載體連接物

（3）啟動子  mRNA

（4）EcoRI和BamHI

解析：（1）連接酶連接黏性末端時，是不區分質粒還是目的基因的，所以可產生目的基因-載體連接物、載體-載體連接物、目的基因-目的基因連接物。要想得到分離出重組質粒，需要對這些連接產物進行分離純化。（2）在含四環素的培養基中，因為酶切位點破壞四環素抗性基因tct^R，所以只有載體-載體連接產物才可能存在。含青霉素的培養基中，酶切位點沒有破壞青霉素抗性基因amp^R，只要含有目的基因-載體連接物、載體-載體連接物都可以生存。（4）同時選用兩種酶之后目的基因和質粒表達載體在酶切后產生的黏性末端不相同，就不會發生任意鏈接。