Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉運肽基因相連，導入油菜葉片細胞并獲得了轉基因油菜品種．
（1）從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因，然后利用技術分別進行擴增．
（2）如圖1，選用圖中的限制酶處理兩個基因后再用酶處理，得到（填圖中字母）端相連的融合基因．
（3）將上述融合基因插入圖2所示Ti質粒的T﹣DNA中，構建并導入農桿菌中．將獲得的農桿菌接種在含的固體平板上培養得到單菌落，再利用液體培養基震蕩培養，得到用于轉化的浸染液．
（4）剪取油菜的葉片放入浸染液中一段時間，此過程的目的是 ， 進一步篩選后獲得轉基因油菜．
（5）用DNA﹣RNA分子雜交技術確定融合基因是否完成了（轉錄、翻譯）．

Answer 1

【答案】
（1）PCR（聚合酶鏈式反應/多聚酶鏈式反應）
（2）ClaⅠ；DNA連接；AD
（3）基因表達載體；四環素
（4）將目的基因導入受體細胞
（5）轉錄
【解析】解：（1）研究人員依據基因的已知序列設計引物，采用PCR法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因．（2）在上述引物設計時，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因．（3）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質粒的T﹣DNA中，構建表達載體即重組質粒并導入農桿菌中．將獲得的農桿菌接種在含四環素的固體平板上培養得到單菌落，再利用液體培養基震蕩培養，可以得到用于轉化的浸染液．（4）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入受體細胞，進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞．該細胞通過植物組織培養技術，可培育成轉基因油菜植株．（5）用DNA﹣RNA分子雜交技術確定融合基因是否完成了轉錄，產生了mRNA；用抗原﹣抗體雜交法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．

所以答案是：（1）PCR（聚合酶鏈式反應/多聚酶鏈式反應）；（2）ClaⅠ；DNA連接；AD；（3）基因表達載體；四環素；（4）將目的基因導入受體細胞；（5）轉錄。

【考點精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術的相關知識點，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術才能正確解答此題．