Question

【題目】為了解基因結構，通常選取一特定長度的線性DNA分子，先用一種限制酶切割，通過電泳技術將單酶水解片段分離，計算相對大��；然后再用另一種酶對單酶水解片段進行降解，分析片段大小。下表是某小組進行的相關實驗。

已知第一線性DNA序列共有 5000bp （bp為堿基對）	第一步水解	產物 （單位bp）	第二步水解	產物 （單位bp）
	A酶切割	3500	將第一步水解產物分離后，分別用B酶切割	1500 2000
		1000		1000
		500		500
	B酶切割	2000	將第一步水解產物分離后，分別用A酶切割	500 1500
		3000		2000 1000
	經A酶和B酶同時切割	2000 1500 1000 500

（1）該實驗中體現出限制酶的作用特點是 。

（2）由實驗可知，在這段已知序列上，A酶與B酶的識別序列分別為 個和 個。

（3）根據表中數據，請在下圖中用箭頭標出相應限制酶的酶切位點。

（4）已知BamH I與BglⅡ的識別序列及切割位點如下圖所示，用這兩種酶和DNA連接酶對一段含有數個BamHI和BglⅡ識別序列的DNA分子進行反復的切割、連接操作，若干次循環后和 序列明顯增多，該過程中DNA連接酶催化 鍵的形成。

Answer 1

【答案】（1）一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列，且在特定的位點切割

（2）2 1

（3）

（4） 磷酸二酯鍵

【解析】（1）該實驗中體現出限制酶的作用特點是酶的專一性．

（2）A酶切割后形成3段，所以有2個識別位點，B酶切割后形成2段，所以有1個切割位點．

（3）由于酶B只有一個限制酶切位點，即在2000和3000之間，可以先標注出；又由于酶A又可以將2000的這段切成500和1500的，結合酶A單獨切割又可以標注其切割位點，同理標出另一個切割位點，答案如下圖：

（4）巳知BamHI與BglII的識別序列及切割位點如圖2所示。用這兩種酶和DNA連接酶對一段含有數個BamHⅠ和BglⅡ識別序列的DNA分子進行反復的切割、連接操作，若干循環后和序列明顯增多。DNA連接酶催化形成的是磷酸二酯鍵。