Question

【題目】土壤中含有能將難溶性磷酸鹽轉變成植物可以吸收利用的可溶性磷的優良解磷菌株Q。下圖1表示制備固體培養基過程中的某操作，圖2是科研人員從土壤中分離出菌株Q的部分過程示意圖。

請回答下列問題：

（1）圖1所示操作稱為__________________，待平板冷凝后__________，以防止__________________。

（2）圖2所示接種方法是_______________________。在3個平板上分別接入0．1 mL稀釋液，經適當培養后，3個平板上菌落數分別是38、42、40，則1 g土壤中的活菌數約為__________________個。

（3）圖是某同學利用不同于圖2方法分離菌株Q的示意圖。下列對其操作及結果的敘述錯誤的有_______。

a．操作前用無水乙醇對雙手進行消毒處理

b．劃線時沾有菌種的接種環不能插入培養基中

c．只有在⑤區域中才能得到所需菌落

d．整個過程需要對接種環進行6次灼燒

（4）固體培養基中難溶性磷酸鹽在菌株Q的作用下溶解，會在菌落周圍形成透明圈（如下圖所示），透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物溶解難溶磷酸鹽的能力大小。下表是初步篩選出的三種優良解磷菌株。

菌株	透明圈直徑(D)	菌落直徑(d)
M—3—01	18．8	12．3
B3—5—6	20．7	8．0
T—4—01	9．1	6．5

根據實驗結果分析，溶解難溶性磷酸鹽能力最強的菌株是______________。該菌種分離純化后，常用______________________法進行長期保存。

Answer 1

【答案】倒平板 倒置 皿蓋上的冷凝水落入培養基 稀釋涂布平板法 4×108 a、c B3－5－6 甘油管藏

【解析】

1、微生物常用的接種方法：

①平板劃線法：將已經熔化的培養基倒入培養皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養皿表面，經培養后可形成單個菌落。

2、計算樣品菌液中的菌株數時，每克樣品中的菌株數=(C÷V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表樣品菌液的稀釋倍數。

（1）圖1所示操作稱為倒平板，待平板冷凝后需要將其倒置，以防止皿蓋上的冷凝水落入培養基，對培養基造成污染。

（2）圖2所示接種方法是稀釋涂布平板法，1g土壤共稀釋了106倍。平板上生長的平均菌落數=(38+42+40)÷3=40個，每克樣品中的菌株數=(C÷V)×M=(40÷0.1)×106=4×108個。

（3）a、操作前用70%的酒精對接種人員的雙手進行消毒處理，a錯誤；

b、劃線時沾有菌種的接種環不應劃破培養基表面，b正確；

c、在5個區域中，只要有單個活細菌，通過培養即可獲得所需菌落，c錯誤；

d、在每次劃線前和最后一次劃線結束均需對接種環滅菌，因此需要對接種環進行6次灼燒，d正確。

故選ac。

（4）根據實驗原理中“透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物溶解難溶磷酸鹽的能力大小”，結合表格數據可以確定溶解難溶性磷酸鹽能力最強的菌株是B3-5-6。對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏法。