Question

【題目】微生物強化采油法是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度、降低石油黏度的原理，通過向油井中注入含微生物的水來提高采油率的新技術。以下是人們篩選、純化和擴大培養該類微生物的實驗操作。請回答相關問題：

（1）為了獲得能降解石油的微生物菌種，可在長期被石油污染的土壤中取樣，并在含有氮源、______等的培養基中添加______進行選擇培養。

（2）如圖為平板劃線法接種后的示意圖。在圖示劃線接種的整個操作過程中，對接種環至少需進行______次灼燒滅菌。接種后蓋上皿蓋，將平板倒置放入恒溫箱中培養，其中“倒置”的目的是______。在適宜條件下培養劃線接種后的圖示平板，發現第四劃線區域的劃線上都不間斷地生長有菌落，而第五劃線區域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上都有菌落。據圖分析造成劃線無菌落最可能的操作失誤是：______。

（3）接種培養一段時間后在培養基上形成降油圈，此時選取______就可能獲得高效菌株。

（4）在擴大培養過程中需要對微生物進行計數：以0.2mL培養液樣品涂布于固體培養基上進行培養，最后統計了三個平板的菌落數分別是199、185、219．則樣品中該種微生物的數量為______個/mL，該統計結果應該______（請選填“低于”或“高于”）活菌的實際數目。與顯微鏡直接計數法相比，此計數方法測得的該種微生物數較______（請選填“少”或“多”）。

Answer 1

【答案】水、無機鹽 石油 6 防止培養皿中的水珠落入培養基和避免培養基水分揮發過快 接種環灼燒后為冷卻 降油圈大的菌落 1005 低于 少

【解析】

從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養、梯度稀釋、涂布培養和篩選菌株。此過程中需要使用選擇培養基，培養基需要進行高壓蒸汽滅菌，常用的接種方法主要有稀釋涂布平板法和平板劃線法。

（1）為了獲得能降解石油的微生物菌種，可在長期被石油污染的土壤中取樣應選用以石油為唯一碳源的選擇培養基進行篩選和純化該類微生物，培養基中還應加入水、無機鹽和氮源。

（2）接種環在每次接種前和接種結束后都要通過灼燒來滅菌，所以完成步驟④中5次劃線操作前都要灼燒滅菌，接種結束后還需灼燒滅菌1次，以防止造成污染，因此完成步驟④共需灼燒接種環6次。接種后蓋上皿蓋，為了避免培養基被污染和防止培養基水分過快揮發，應將平板倒置放入恒溫箱中培養。第五劃線區域所劃的第一條線上無菌落最可能的操作失誤是接種環灼燒后為冷卻，導致高溫殺死菌種。

（3）該類微生物是厭氧微生物，接種后應密封培養，一段時間后選擇降油圈大的菌落進行培養可獲得高效菌株。

（4）計算微生物的數量應取三個平板的平均值，即（199+219+185）÷3÷0.2=1005個/mL。由于一個菌落可能是一個或多個細菌長成的，因此該結果會低于實際值。由于前者統計的是活菌數，與顯微鏡直接計數法相比，此計數方法測得的該種微生物數較少