Question

【題目】【加試題】回答下列（一）、（二）小題：

（一）不同濃度還原型谷胱甘肽（GSH）處理對甘藍泡菜中硝酸還原酶（NR）活性和亞硝酸鹽含量的影響如圖所示。

請回答：

（1）甘藍泡菜的腌制和樣品處理：腌制甘藍泡菜時，所用鹽水需煮沸，其目的是___________。甘藍樣品處理過程中，加硫酸鋅產生沉淀后，水浴加熱的目的是___________。然后冷卻至室溫，用濾紙過濾，用水淋洗2~3次，將___________在容量瓶中定容。

（2）測定亞硝酸鹽含量：取10mL樣品溶液，進行顯色處理。用光程為1cm的_________在550nm處測定光密度值。

（3）甘藍泡菜發酵過程中NR活性和亞硝酸鹽含量均呈______________的趨勢。添加不同濃度的GSH處理均可_________NR活性和亞硝酸鹽含量的峰值。當添加GSH的質量分數較低時，NR活性和亞硝酸鹽含量隨著GSH濃度的增大而_________。

（二）現采用建立轉基因小鼠的方法來研究CA65基因的作用，請回答有關的問題：

（1）CA65轉基因小鼠載體的構建：將CA65基因用______________酶切后，插入到角蛋白基因中，構建CA65轉基因載體。

（2）CA65轉基因小鼠的獲得與檢測：用____________法將轉基因載體注射到小鼠的__________中，體外培養獲得早期胚胎再__________到代孕母鼠子宮角或____________中。小鼠出生10天后提取其DNA，用__________技術擴增CA65基因來檢測CA65轉基因小鼠。

（3）轉基因組與野生對照組相比，CA65轉基因小鼠的淋巴管明顯增多，管徑變粗。該實驗結果說明CA65可以____________________。

Answer 1

【答案】 殺滅雜菌（去除氧氣） 進一步讓蛋白質沉淀 濾液和洗滌液 比色杯 先上升后下降 抑制 降低 限制性核酸內切酶 顯微注射 受精卵 胚胎移植 輸卵管 PCR 誘導淋巴管的增生

【解析】（一）試題分析：分析兩坐標系中多組曲線發現，甘藍泡菜發酵過程中NR活性和亞硝酸鹽含量均呈先上升后下降的趨勢，同時添加不同濃度的GSH處理均可抑制NR活性和亞硝酸鹽含量的峰值。

（1）腌制泡菜時，所用鹽水需煮沸的目的主要是殺滅雜菌同時也去除氧氣（因為需要厭氧發酵）。樣品處理過程中需加硫酸鋅產生沉淀，之后水浴加熱的是為了進一步讓蛋白質沉淀。用濾紙過濾并用水淋洗2～3次，將濾液和洗滌液在容量瓶中定容。

（2）測定光密度值時需要用光程為1cm的比色杯在550nm處測定。

（3）根據前的分析可知，甘藍泡菜發酵過程中NR活性和亞硝酸鹽含量均呈先上升后下降的趨勢。添加不同濃度的GSH處理均可抑制NR活性和亞硝酸鹽含量的峰值。當添加GSH的質量分數較低時，NR活性和亞硝酸鹽含量隨著GSH濃度的增大而降低。

（二）（1）構建基因表達載體時，需要用限制性核酸內切酶切割目的基因（CA65基因），再用DNA連接酶將其連接在載體（角蛋白基因）中。

（2）將目的基因導入動物細胞培育轉基因動物時，通常用顯微注射法將轉基因載體注射到小鼠的受精卵中，體外培養獲得早期胚胎后，再胚胎移植到代孕母鼠子宮角或輸卵管中。擴增目的基因需要用PCR技術。

（3）若轉基因組與野生對照組相比，CA65轉基因小鼠的淋巴管明顯增多，管徑變粗。該實驗結果說明CA65可以誘導淋巴管的增生。