Question

19．隨著社會的發展，石油產品的使用越來越多，石油烴污染也越來越嚴重．為了篩選出分解石油烴能力強的微生物，人們不斷地進行研究．下圖為獲取能分離出分解石油烴的微生物的土壤樣品后的研究過程，請回答有關問題：

（1）分解石油烴的微生物一般要從土壤中分離，獲取相應土壤樣品的取樣地點最好選在石油污染明顯處．
（2）為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，①～④所用培養基中成分的特點是只含石油烴一種碳源，從而有利于目的菌的生長，抑制其他微生物的生長．
（3）④中的培養基從物理特征看屬于固體培養基，其可以通過向培養基中加入一定量的瓊脂來實現．對④中的培養基進行接種常采用的兩種方法分別是平板劃線法和稀釋涂布平板法．
（4）在實驗室應采用高壓蒸汽滅菌法對培養基進行滅菌處理．
（5）與固定化酶術相比，固定化細胞固定的是多酶系統（或一系列酶，多種酶）．
（6）制備固定化酵母細胞，常用的固定化材料是海藻酸鈉，使用了如圖中方法[③]包埋法（填出號碼與名稱）
（7）制作固定化酵母細胞時，充分混合均勻的酵母細胞溶液可在飽和CaCl₂溶液中形成凝膠珠，在海藻酸鈉熔化的過程中注意事項是小火間斷加熱海藻酸鈉溶液濃度過高（或針筒口離液面過近，高度不夠）．
（8）制備固定化酶不宜用包埋法的原因酶分子較小，容易從包埋材料中漏．

Answer 1

分析 （1）培養基的營養構成：各種培養基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽．培養基的分類：①按物理性質分，分為液體培養基和固體培養基，固體培養基中含有凝固劑，一般是瓊脂．②按化學成分分，分為天然培養基和合成培養．兩者的區別是天然培養基成分不確定，合成培養基成分的含量是確定的．③按用途分，分為選擇培養基和鑒別培養基．選擇培養基主要是培養、分離特定的微生物，培養酵母菌可在培養基中加入青霉素；鑒別培養基可以鑒定不同的微生物，比如鑒別飲用水中是否含有大腸桿菌，可以用伊紅-美藍培養基，如果菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤，說明有大腸桿菌．
（2）常用滅菌方法：灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法．
培養基、培養皿、接種環、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌和消毒方法依次：高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌、化學消毒、紫外線滅菌、巴氏消毒法．
（3）接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法．接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，并在培養基表面形成單個細菌繁殖而成的子細胞群體--菌落．

解答 解：（1）要獲取相應的菌種，應到相應的環境中獲取，獲取土壤樣品的取樣地點最好選在石油污染明顯處．
（2）有些培養基可以抑制其他微生物的生長，這樣的培養基可稱做選擇培養基．因此，為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，過程①一④所用培養基，其成分的特點是只含石油烴一種碳源，從而有利于目的菌的生長，抑制其他微生物的生長．
（3）④中的培養基從物理特征看屬于固體培養基，可加入凝固劑瓊脂處理，常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法．
（4）配置好的培養基進行高壓蒸汽滅菌，在整個微生物的分離和培養中，一定要注意在無菌條件下進行．
（5）（6）酶適用于采用化學結合法或物理吸附法，細胞多適用于采用包埋法固定，固定化酵母細胞，常用的方法是③包埋法．常用材料的是海藻酸鈉，固定化細胞固定的是多酶系統（或一系列酶，多種酶）．

（7）酵母細胞膠液能在飽和的CaCl₂溶液中形成凝膠珠．若海藻酸鈉濃度過高或針筒距離液面過近，得到的凝膠珠可能不是圓形．
（8）制備固定化酶不宜用包埋法的原因是酶分子較小，容易從包埋材料中漏出．
故答案為：
（1）石油污染明顯處
（2）只含石油烴一種碳源 目的菌
（3）固體 瓊脂 平板劃線法 稀釋涂布平板法
（4）高壓蒸汽滅菌
（5）多酶系統（或一系列酶，多種酶）
（6）海藻酸鈉  ③包埋法
（7）CaCl₂　小火間斷加熱海藻酸鈉溶液濃度過高（或針筒口離液面過近，高度不夠）
（8）酶分子較小，容易從包埋材料中漏

點評 本題的知識點是微生物培養過程中的無菌技術，分離微生物的常用的接種方法和接種工具，主要考生能理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯系的能力．